超純水在HPLC檢測(cè)中的主要角色

①樣品溶解;

②標(biāo)準(zhǔn)樣品制備;

③作為空白試劑;

④清洗器皿。

水質(zhì)不純對(duì)HPLC檢測(cè)的影響

離子雜質(zhì)的危害：影響水的電導(dǎo)率和pH;與溶液中組分反應(yīng)。改變吸收譜線，影響儀器判讀;一些離子會(huì)腐蝕儀器

有機(jī)物雜質(zhì)的危害：干擾儀器分析的背景;微生物滋生的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。

顆粒雜質(zhì)的危害：阻塞過(guò)濾系統(tǒng);損壞泵系統(tǒng);吸附電荷影響離子濃度。折射光線影響判讀;提供細(xì)菌滋生載體。

微生物雜質(zhì)的危害：產(chǎn)生菌膜持續(xù)釋放污染物;堵塞儀器通道。

氣體雜質(zhì)的危害：影響水的離子濃度和PH值;直接參與反應(yīng)。影響水有效體積;影響光學(xué)測(cè)定結(jié)果。

TOC過(guò)高的危害：靈敏度降低：移動(dòng)相中的有機(jī)分子干擾樣品峰。分析結(jié)果難以分析及重復(fù)性降低：出現(xiàn)unknown的peak判斷錯(cuò)誤因而提高濃度：雜質(zhì)與分析物一起流出。滯留時(shí)間改變(形成復(fù)合物)雜質(zhì)與介質(zhì)非可逆性的結(jié)合導(dǎo)致分析時(shí)間過(guò)長(zhǎng)并且分辨率降低。

HPLC使用者的期望

穩(wěn)定的基線(容易進(jìn)行面積積分)。

良好的分辨率(=分離能力)。

易辨認(rèn)的對(duì)稱性波峰。

好的波峰高度/寬度比。

穩(wěn)定的洗脫時(shí)間。

為何在HPLC中要使用超純水?

用水的純度決定實(shí)驗(yàn)的可控性與重復(fù)性使用超純水對(duì)于HPLC分析結(jié)果有以下優(yōu)點(diǎn)：

低顆粒物質(zhì)污染：較硬的顆粒會(huì)刮傷增壓泵,較軟的顆粒會(huì)阻塞進(jìn)入管柱前的濾膜。顆粒還可能改變樣品的組分。

低離子污染：洗脫緩沖液的穩(wěn)定性好。避免腐蝕性離子影響高壓輸液泵等配件的使用壽命。

低TOC污染：改善儀器偵測(cè)靈敏性,分辨率及重復(fù)性，更穩(wěn)定的滯留時(shí)間,色譜基線穩(wěn)定及保證管柱介質(zhì)的合理使用壽命。

低微生物污染：避免管柱中出現(xiàn)有機(jī)分子的污染，色譜柱堵塞。低氣泡：流量穩(wěn)定，基線平穩(wěn)，避免色譜圖上出現(xiàn)噪聲峰，干擾分析。